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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
1.掌握聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的原理。
2. 掌握移液槍和 PCR 儀的基本操作技術(shù)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
PCR 技術(shù)，即聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）是由美國(guó) PE Cetus 公司的 Kary Mullis 在 1983 年（1993 年獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)）建立的。這項(xiàng)技術(shù)可在試管內(nèi)的經(jīng)數(shù)小時(shí)反應(yīng)就將特定的 DNA 片段擴(kuò)增數(shù)百萬(wàn)倍，這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術(shù)在分子生物學(xué)研究中具有舉足輕重的意義，極大地推動(dòng)了生命科學(xué)的研究進(jìn)展。它不僅是 DNA 分析常用的技術(shù)，而且在 DNA 重組與表達(dá)、基因結(jié)構(gòu)分析和功能檢測(cè)中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
PCR 可以被認(rèn)為是與發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)的 DNA 復(fù)制過(guò)程相似的技術(shù)，其結(jié)果都是以原來(lái)的 DNA 為模板產(chǎn)生新的互補(bǔ) DNA 片段。細(xì)胞中 DNA 的復(fù)制是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程。參與復(fù)制的有多種因素。PCR 是在試管中進(jìn)行的 DNA 復(fù)制反應(yīng)，基本原理與細(xì)胞內(nèi) DNA 復(fù)制相似，但反應(yīng)體系相對(duì)較簡(jiǎn)單。
PCR 由變性 -- 退火 -- 延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板 DNA 的變性：模板 DNA 經(jīng)加熱至 94℃左右一定時(shí)間后，使模板 DNA 雙鏈或經(jīng) PCR 擴(kuò)增形成的雙鏈 DNA 解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；
②模板 DNA 與引物的退火 (復(fù)性)：模板 DNA 經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至 55℃左右，引物與模板 DNA 單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；
③引物的延伸：DNA 模板 -- 引物結(jié)合物在 Taq 酶的作用下，以 dNTP 為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板 DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。
重復(fù)循環(huán)變性 -- 退火 -- 延伸三過(guò)程，就可獲得更多的 “半保留復(fù)制鏈"，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需 2～4 分鐘， 2～3 小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。
三、實(shí)驗(yàn)試劑與器材
模板 DNA、2.5mmol/L dNTP
Taq DNA 聚合酶（5U/μL）、SSR 引物
10 ×buffer、15mmol/L Mg2+、ddH2O
PCR 儀、移液槍、PCR 板
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1、配制 20μL 反應(yīng)體系，在 PCR 板中依次加入下列溶液：
模板 DNA 2μL
引物 1 1μL
引物 2 1μL
dNTP 1.5μL
MgCl2 2μL
10×buffer 2μL
ddH2O 10μL
Taq 酶 0.5
2、設(shè)置 PCR 反應(yīng)程序。
3、上樣，啟動(dòng)反應(yīng)程序。
4、擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
本生生物代理實(shí)驗(yàn)室耗材,PCR 耗材品種全，可替代儀器原廠耗材，性價(jià)比高，質(zhì)量穩(wěn)定，對(duì)用戶可以節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本。
適應(yīng)客戶：
醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR 實(shí)驗(yàn)室，中心實(shí)驗(yàn)室，肝病中心；第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，科研院所，大專院校，制藥廠，試劑生產(chǎn)廠家，疾控中心，檢驗(yàn)檢疫。
技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) 管理登陸 網(wǎng)站地圖
