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如何正確使用ELISA板進(jìn)行實驗?
更新時間:2025-10-24瀏覽:21次

  如何正確使用ELISA板進(jìn)行實驗?

  以下是ELISA板正確使用的實驗指南,本生結(jié)合關(guān)鍵操作要點和常見問題解決方案:

  一、實驗前準(zhǔn)備

  板選擇與處理?

  優(yōu)先選用聚苯乙烯材質(zhì)96孔板(吸附性能均衡),新板需用去離子水沖洗去除雜質(zhì)?

  包前用碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)平衡,避免溫差導(dǎo)致板變形

  試劑配制?

  標(biāo)準(zhǔn)品需現(xiàn)配現(xiàn)用,凍存樣本避免反復(fù)凍融(建議分裝保存)

  封閉液推薦5% BSA-PBST(含0.05%吐溫20),37℃預(yù)溫30分鐘

  二、核心操作步驟

  包被與封閉?

  抗原/抗體包被濃度1-10 μg/mL,100μL/孔,4℃過夜或37℃ 2小時?

  封閉液需覆蓋孔底,37℃孵育1小時,拍干時避免殘留液體

  加樣與孵育?

  樣本與標(biāo)準(zhǔn)品同步加樣,避免邊緣效應(yīng)(邊緣孔可加PBS緩沖)

  37℃孵育時用保鮮膜封板,每10分鐘輕震混勻一次

  三、關(guān)鍵質(zhì)控點

  洗滌規(guī)范?

  手工洗板需拍干后立即加洗滌液,機器洗板需檢查針頭通暢性

  洗滌次數(shù)3-5次,最后一次拍干后30秒內(nèi)加下一試劑

  顯色控制?

  TMB避光孵育時間需預(yù)實驗確定(通常10-20分鐘)

  終止液加入后15分鐘內(nèi)讀數(shù),雙波長檢測(450/630nm)

  四、常見問題處理

  高背景?:增加洗滌次數(shù)至5次,或更換封閉液為5%脫脂奶粉?

  板間差異?:同一實驗使用同一批次板,加樣時使用多通道移液器

  注:具體參數(shù)需根據(jù)試劑盒說明書調(diào)整,建議每板設(shè)置陰陽性對照及標(biāo)準(zhǔn)曲線(R2>0.99)。

  注:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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